Se ha descrito una isoforma de bajo peso molecular, 37 kDa, de la RNasa L en extractos de células mononucleares de sangre periférica. La proporción de las dos isoformas de la RNasa L (37kDa/83kDa) se ha propuesto como un posible marcador bioquímico del síndrome de fatiga crónica (SFC). La brucelosis crónica (BC) es una entidad que comparte clínica con el SFC. Sin embargo, no hay estudios donde se haya determinado la RNasa L en pacientes con BC.
Este estudio presenta dos objetivos: primero, determinar la isoforma de 37-KDa 2-5A RNasa L y la relación entre las dos isoformas 37kDa/83KDa en pacientes con brucelosis crónica con síntomas y comparar sus resultados (i) con pacientes con antecedentes de brucelosis asintomáticos,(ii) con otros pacientes con sindrome de fatiga crónica no relacionados con brucelosis, así como (iii) con individuos sanos; y segundo, demostrar si existe una correlación entre los niveles de carga bacteriana detectada mediante PCRtrQ y la presencia de la isoforma de 37kDa 2-5A RNasaL.

Diseño: Estudio observacional comparativo tipo casos-control.

Ámbito del estudio: CHUA (Hospitales de Almansa, Villarrobledo y General) y Hospital de Hellín (Albacete).

Sujetos del estudio: En este estudio incluiremos cuatro grupos de sujetos a estudio: (i) pacientes con brucelosis crónica con síntomas, (ii) pacientes con antecedentes de brucelosis asintomáticos, (iii) pacientes con sindrome de fatiga crónica no relacionados con brucelosis e (iv) individuos sanos.

Instrumentalización: A cada muestra se le realizaran las pruebas serológicas convencionales (Rosa de Bengala, seroaglutinación en tubo y prueba de Coombs anti-Brucella) y la PCR en tiempo real cuantitativa (PCRtrQ). Mediante esta técnica detectaremos y cuantificaremos un fragmento de ADN de 251pb de B. melitensis. Después de la amplificación, el número de copias de ADN de B. melitensis se calculará a partir de una curva estándar. Cada muestra se analizará por triplicado y se considerará un resultado PCRtrQ positivo, cuando al menos una de las réplicas sea positiva. La extracción de células mononucleares a partir de sangre total se realizará con un gradiente de Ficoll y se cuantificarán las proteínas mediante el método BCA. Posteriormente, se realizará el análisis de RNasa L mediante Western Blots, donde la proteína de interés se detectará con un anticuerpo monoclonal específico y un anticuerpo secundario anti-mouse. El revelado de la proteína se llevará a cabo mediante el uso de quimioluminiscencia.

Determinaciones: A todos los sujetos incluidos en el estudio se les invitará a participar y se les solicitará el consentimiento informado. Se les realizará una evaluación clínica exhaustiva, exploración y analítica general así como un cuestionario de calidad de vida (MOS SF36 vs2), serología para Brucella, PCRtrQ para B. melitensis y se determinará la isoforma de 37kDa de la RNasa L y la relación entre las dos isoformas 37kDa/83KDa.